本文目录一览
- 1，暗黑破坏神2传奇兽人怎么抓
- 2，知道巴萨套能出哪些传奇
- 3，WB实验问题总结Western blot蛋白质印迹
1，暗黑破坏神2传奇兽人怎么抓
玩家主要可以通过以下三种方法来获得传奇兽人。野外招募关于抓野外传奇，野外队长要晋级史诗和传奇一般是只有两种。一种是多次击杀你是有几率晋级的，还有一种就是会复活的被你多次杀死也会晋级传奇，这类传奇的话可能致命缺点会多一些，抓来慢慢养也行吧。补充一点第二章才能抓兽人培养晋升已经招募的兽人，能够晋升史诗传说么？其实是可以，箱子里面可以开出史诗和传奇训练卷轴，对你想升级的用了就行，随机减少弱点获得增强特性。小队长升级有几率变传奇，我的就变了一个。箱子首先你如果能连上WB的,你的银币除了升级武器和打孔之后基本用处就是买箱子。1500一个箱子,必出一个史诗兽人。送死只能提升兽人等级,不会提升品质。但要注意无论是传奇兽人别的兽人都是有几率会背叛的（具体的在游戏中的复仇女神系统中有介绍）。背叛后的兽人如果有钢铁意志是不能招降的。
2，知道巴萨套能出哪些传奇
国服很多卡都没出，就结合韩服的来下，都是斗鱼主播大神的。赛季卡简称提示WL=世界传奇，06W=06世界杯，WB=现役最佳球员（现役传奇）、14T=14~15赛季五大联赛最佳阵容球员、14W=14世界杯、10U=10欧冠、08E=08欧洲杯门将GK14T/14布拉沃14特尔施特根10巴尔德斯分析：14T布拉沃最好，其次是10巴尔德斯。中后卫CB10U/14T/15/11皮克07/10阿比达尔15马蒂厄15维尔马伦06马克斯。分析：10U皮克和07阿比达尔的组合是我认为巴萨套最好的CB组合，也可选择15马蒂厄。边后卫LB/RB14W/15阿尔巴10U/14T/14W/11阿尔维斯07/10阿比达尔08/10U凯塔08卡塞雷斯10U/09马克斯维尔10U/11阿德里亚诺06莫塔分析：新引擎下的巴萨边后卫相比老引擎要好用很多，特别是阿尔维斯，他与阿尔巴一右一左，成为堪比明星套的边后卫组合，阿尔巴14W和15相差不大，而阿尔维斯目前国服最好的14W只能排在第三，未来最强阿尔维斯是10U，其次是14T。另外，中后卫上的15马蒂尔和07阿比达尔也可客串边后卫。后腰CDM10U/15布斯克茨10U/10/15马斯切拉诺08/09亚亚·图雷14W亚历山大·宋06莫塔06马克斯08/10U凯塔。分析：10U的布斯克茨与10U的马斯切拉诺非常强力，这一对CDM组合放在明星套也是有一席之地，单后腰建议10U布斯克茨。中前卫CM08E/10U/11/09伊涅斯塔11/09/10哈维11法布雷加斯15拉基蒂奇08/09亚亚·图雷分析：由于国服哈维很可能不会再产出新卡，那么哈维在国服的巅峰卡将固定在11卡，相比起08E伊涅斯塔的变态数值，而且还是五星来说，CM的第一选择将是08E的伊涅斯塔，双CM可以上哈维。边前卫边锋LM/RM07/06罗纳尔迪尼奥14T/14W/15内马尔14T/10U/14W/15/08/09梅西10U/11/14W佩德罗07亨利14W桑切斯15阿尔达·图兰15A.比达尔分析：小罗、内马尔与梅西是最适合这个位置的巴萨球员。10U与14T梅西各有优劣，未来看国服出卡情况购买。前腰CAM08E/10U/11/09伊涅斯塔11/09/10哈维15拉基蒂奇11法布雷加斯15阿尔达·图兰分析：前腰最佳人选还是08E伊涅斯塔或11哈维。前锋CF14T/10U/14W/15/11梅西09伊布14T/15苏亚雷斯07亨利10U/10大卫·比利亚10U/08/09博扬07/06罗纳尔迪尼奥前锋ST09伊布14T/15苏亚雷斯06埃托奥07亨利10U/10比利亚06W拉尔森分析：巴萨的锋线实在是太可怕，高度、技术、速度、射术该有的都有，可以任意组合搭配。所以最适合巴萨的阵形就是3前锋，搭配2CM+1CDM或1CAM+2CDM。01巴萨套韩服最强阵02巴萨套国服最强阵(4-1-2-3)03巴萨套国服最强阵(4-2-2-2)分析：以上的阵容中，09伊布都可用15苏亚雷斯或06埃托奥代替，14T内马尔可用07小罗代替。后防线上15马蒂厄可代替07阿比达尔和皮克搭档，门将三个都可以，看个人喜好了。4-1-2-3阵形可使用金胜涉的最新战术板，4-2-2-2阵形可使用下面乌克兰大神Yozhyk的传控战术板。
3，WB实验问题总结Western blot蛋白质印迹
答：原因有很多： a) 你的细胞中不表达这种蛋白质，换一种细胞； b) 你的细胞中的蛋白质被降解掉了，你必需加入PMSF，抑制蛋白酶活性； c) 你的抗体不能识别目标蛋白，多看看说明，看是否有问题。 答：a) 有沉淀可能因为你的蛋白没有变性完全，可以适当提高SDS 浓度，同时将样品煮沸时间延长； b) 也不排除你的抗原浓度过高，这时再加入适量上样缓冲液即可。 答：可以选择0.2μml的膜，同时缩短转移时间。也可以将两张膜叠在一起，再转移。其他按步骤即可。 答：可以加大抗原上样量。这是最主要的。同时也可以将一抗稀释比例降低。 答：减少抗原上样量，降低一抗浓度，改变一抗孵育时间，提高牛奶浓度。 答：你的一抗浓度较高，二抗上HRP 催化活力太强，同时你的显色底物处于一个临界点，反应时间不长，将周围底物催化完，形成了空白即“反亮现象”。将一抗和二抗浓度降低，或更换新底物。 答：如果能够排除下面的几个问题那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。 a) 二抗的HRP 活性太强，将底物消耗光； b) ECM底物中H2O2，不稳定，失活； c) ECL底物没覆盖到相应位置； d) 二抗失活。 是什么原因呢? 答：a) 可能是红灯造成的, 胶片本来就被曝光了，可以在完全黑暗的情况下操作.看是否有改善； b) 显影时间过长。 答：DAB 有毒，但是比较灵敏，是HRP 最敏感的底物；ECM结果容易控制，但被催化时灵敏度差一点，但如果达到阀值，就特别灵敏，可以检测pg 级抗原。要看你实验的情况。答：a)抗原形成了二聚体。增多巯基乙醇量，煮沸变性时间延长，可以打开二聚体； b)蛋白本身的修饰如：糖基化，磷酸化等。 答：可能是： a)样品浓度过低； b)转移时间不够。 答：NaF是一种广谱磷酸化酶的抑制剂，一般最好加。但是不加也可以，大部分时候是不用加的。 13. 要验证某个细胞上有无该蛋白的存在，需要做免疫组化和western blot试验吗？做这两个试验时的一抗和二抗可以共用吗？ 答：① 免疫组化可以用来进行定位，但是不能精确定量，而且有时会有假阳性，不易与背景区分；Western blot可以特异性检测某个蛋白质分子，进行定量，但是不能定位。 ② 两种实验的一抗有时候不能通用，公司的产品说明一般都会说明可以进行什么实验，在免疫组化时，是否适合石蜡切片或者冰冻切片。 ︶ 条带呈笑脸状 原因：凝胶不均匀冷却，中间冷却不好; 电泳系统温度偏高。 ︵ 条带呈皱眉状 原因：可能是由于装置不合适，特别可能是凝胶和玻璃挡板底部有气泡，或者两边聚合不完全。 拖尾 原因：样品溶解不好。 纹理（纵向条纹） 原因：样品中含有不溶性颗粒。 条带偏斜 原因：电极不平衡或者加样位置偏斜。 条带两边扩散 原因：加样量过多。膜封闭不够 延长封闭的时间；选择更加适合的封闭液。 一抗稀释度不适宜 对抗体进行滴度测试，选择最适宜的抗体稀释度。 一抗孵育的温度偏高 建议4℃结合过夜。 选择的膜容易产生高背景 一般硝酸纤维素膜的背景会比PVDF膜低。 膜在实验过程中干过 实验过程中要注意保持膜的湿润。 检测时曝光时间过长 减少曝光时间。 目的蛋白有多个修饰位点（磷酸化位点、糖基化位点、乙酰化位点等），本身可以呈现多条带。 查阅文献或进行生物信息学分析，获得蛋白序列的修饰位点信息，通过去修饰确定蛋白实际大小。 目的蛋白有其它剪切本 查阅文献或生物信息学分析可能性。 样本处理过程中目的蛋白发生降解 加入蛋白酶抑制剂；样本处理时在冰上操作。 上样量过高，太敏感 适当减少上样量。 一抗特异性不高 重新选择或制备高特异性的抗体。 一抗不纯 纯化抗体 一抗或者二抗浓度偏高 降低抗体浓度。可能的原因及建议 检测样本不表达目的蛋白 选择表达量高的细胞作为阳性对照，用于确定检测样本是否为阴性。 检测样本低表达目的蛋白 提高上样量，裂解液中注意加入蛋白酶抑制剂。 转移不完全或过转移 可以用丽春红染膜并结合染胶（考马斯亮蓝）后确定条带是否转至膜上或转移过头；适当调整转膜的时间和电流。 抗体不能识别测试种属的相关蛋白 购买抗体前应当认真阅读抗体说明书，确定其是否能够交叉识别测试种属的对应蛋白。 一抗孵育时间不足 建议4℃结合过夜。 二抗与一抗不匹配 选择针对一抗来源的种属的抗体。 洗膜过度 洗膜时间不宜过长，加入的去垢剂不宜过强或过多，建议使用0.1%的弱去垢剂Tween-20。膜上多处出现黑点或黑斑 原因：抗体与封闭试剂发生非特异性的结合。 反白（条带显白色） 原因：目的蛋白含量太高或者一抗浓度偏高。 蛋白分子量偏低或偏高 原因：胶浓度不适合，高分子量要用低浓度胶；小分子蛋白要用高浓度胶。 操作有毒试剂时，带手套和口罩，且操作挥发性试剂应在通风橱中进行。
